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お知らせ
News
本庶佑先生ノーベル賞受賞おめでとうございます！ (2018/10/3 T.M.)
2018年ノーベル医学・生理学賞にかかわるクローンを取り揃えております (2018/10/3 T.M.)
活発なご利用をお待ちいたしております。
Focused Resource
 ショウジョウバエ培養細胞での組換えタンパク質発現用プラスミド(2019/2/22 T.Y.)
- ショウジョウバエS2細胞を使った組換えタンパク質発現系は広く利用されています。
これまでも筆者らが構築したpMT-PURO (cat# RDB08532) が組換えタンパク質の発現に用いられていましたが、本誌においては安定発現株の作製をさらに効果的に行うために以下のプラスミドを構築しました。
[more…]
- 1. pMT-PURO2 (cat# RDB12152): ピューロマイシン耐性マーカーのpuromycin N-acetyl-transferase (pac)を安定して発現させるためにpac遺伝子上流にkozak配列を導入したプラスミドです。
- 2. pMT-PURO2G (cat# RDB09004): ピューロマイシン耐性マーカーpacに融合したEGFPを観察することで形質転換効率や遺伝子導入効率の評価ができます。
- 3. pMT-PURO2R (cat# RDB09005): ピューロマイシン耐性マーカーpacに融合したDsRED2を観察することで形質転換効率や遺伝子導入効率の評価ができます。
- 目的遺伝子はmetallothionein プロモーター下流のMCSに挿入します。作製した安定発現株はCuSO4を添加することで目的遺伝子の発現を誘導することができます。
- 論文
Nagahashi, K. et al. Fusion of fluorescent protein to puromycin N-acetyltransferase is useful in Drosophila Schneider S2 cells expressing heterologous proteins. Cytotechnology. 65 (2): 173-178, 2013. PMID : 22706964.
- 寄託されたリソース
pMT-PURO (cat# RDB08532)
pMT-PURO2 (cat# RDB12152)
pMT-PURO2G (cat# RDB09004)
pMT-PURO2R (cat# RDB09005)
オプトジェネティクス（光遺伝学）手法用の発現ベクター(2019/1/11 N.N.)
- 東北大学の石塚 徹先生が開発したチャネルロドプシン発現ベクターが提供可能です。[more…]
Cre/loxPシステムによりmCherry発現を誘導するベクター (2018/12/07 S.H.)
- 大阪大学畠中由美子先生らの研究グループより、Cre/loxPシステムにより誘導可能なmCherry発現ベクターが到着しました。[more…]
- 発表論文では、pCALNL5:mCherryを低濃度のCre組換え酵素発現ベクターと共にマウスの発生E12.5齢のVZ領域へトランスフェクションすることにより、神経前駆細胞をクローナルに標識しました。神経前駆細胞と軸索様突起はmCherryで標識されており、経時的な観察により、軸索様突起の数や長さにより細胞を分類しその動態を明らかにしました。
- 論文
Hatanaka, Y. and Yamauchi, K. Excitatory Cortical Neurons with Multipolar Shape Establish Neuronal Polarity by Forming a Tangentially Oriented Axon in the Intermediate Zone. Cerebral Cortex J., 23: 105, 2013. PMID 22267309.
- 寄託されたリソース
pCALNL5:mCherry (cat# RDB16747)
- Cre組換え酵素発現ベクター
理研DNA BANKでは各種Cre組換え酵素発現ベクター[link]を提供しております。
細胞内小器官可視化クローンのご紹介 (2018/11/13 N.N.)
- 当室ではミトコンドリアや核など15種類の細胞内小器官（オルガネラ）を可視化できるクローンを提供しています。各々のクローンには蛍光タンパク質マーカーやエピトープタグを融合したオルガネラ局在シグナル配列がクローニングされており、細胞内で発現させたマーカーの蛍光による検出、あるいは、抗体によるタグの検出によってオルガネラを観察できます。[more…]
- これらの内12種類は、理化学研究所 生命機能科学研究センター (BDR) の岡田康志先生、高井啓先生、大阪大学産業科学研究所の永井健治先生らによって開発されたNano-lantern による観察が可能です [Takai, A. et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 112 (14): 4352-4356, 2015]。Nano-lanternは、ルシフェラ－ゼと蛍光タンパク質を融合した、従来よりも明るい発光タンパク質です。オルガネラ局在シグナル毎に黄緑色、青緑色、橙色の3色を提供しています。積極的なご利用をお待ちしております。
- 可視化クローンリスト
- Nano-lantern リスト
Dnacondaのおすすめ (過去の掲載記事)
Resource Information
 DNAミスマッチ修復の過程におけるATPの加水分解により、MutSはMutLのエンドヌクレアーゼ活性を亢進する (2019/03/15 N.N.)
- DNAミスマッチ修復はMutSによるミスマッチ塩基対の認識とMutL及び修復にかかわるタンパク質のリクルートによって行われます。[more…]
- MutLの非特異的DNA切断はATP結合により抑制されていますが、そのエンドヌクレアーゼ活性の活性化機構は不明でした。本研究において筆者らはMutLのエンドヌクレアーゼ活性のATP結合依存的な抑制がATPの加水分解によって解除されることを見出しました。なお本研究では,当室から提供したRDB06119 TEx8D08 pET3a/ttha1324 (ttMutS)及び RDB06119 TEx8C04 pET11a/ttha1323 (ttMutL)がATPase assayに使用されました。
- 論文
Shimada A, Kawasoe Y, Hata Y, Takahashi TS, Masui R, Kuramitsu S, Fukui K. MutS stimulates the endonuclease activity of MutL in an ATP-hydrolysis-dependent manner. FEBS J. 280(14):3467-3479, 2013. PMID : 23679952.
- 使用されたリソース
TEx18D08 pET3a/ttha1324 (Thermus thermophiles MutS)
TEx18C04 pET11a/ttha1323 (Thermus thermophiles MutL)
オートファジー活性を定量的に評価できるプローブ(2019/2/1 N.N.)
- オートファゴソームを可視化してオートファジーを観察するためにMAP1LC3 (LC3)と蛍光タンパク質を融合させたプローブが利用されています。一方で、オートファジーの進行に伴いプローブの蛍光が減衰するため、定量的な活性評価には不向きでした。
- 東京大学の水島昇先生らは、LC3とGFPを融合したGFP-LC3と、末端のグリシン (G)を欠くLC3とRFPを融合したRFP-LC3ΔGを同時に当モル量で発現するプローブを開発しました。[more…]
Akaluc 新規開発の赤色発光のルシフェラーゼ (2018/5/7 N.N.)
- ホタルの生物発光システムは、生命現象のイメージングに汎用されていますが、発光基質の組織透過性が低いという欠点がありました。理研脳神経科学研究センターの宮脇 敦史先生、岩野 智先生、電気通信大学大学の牧 昌次郎先生らのグループは、生きた動物個体深部を非侵襲的に観察できる人工生物発生システムAkaBLIを開発しました。[more…]
- AkaBLIシステムは、組織透過性の向上した人工基質AkaLumineとAkaLumineに合わせて開発した人工酵素Akalucで構成されています。AkaBLIの発光シグナルの強度は、従来と比べ100～1000倍です。
- 宮脇研究室より、人工酵素Akalucの発現ベクターが当遺伝子材料開発室に寄託され、提供可能となりました。皆様の活発なご利用をお待ちしております。
- 論文
Iwano, S. et al., Single-cell bioluminescence imaging of deep tissue in freely moving animals. Science 359 (6378): 935-939 (2018). PMID 29472486.
- プレス
「脳の深部を非侵襲的に観察できる人工生物発光システムAkaBLI」 (2018/2/23 理研)
- DNA resource
pcDNA3 Venus-Akaluc (cat# RDB15781)
ビオチン化タグ付加転写因子による安定したChIP-seq解析 (2018/2/16 K.N.)
- ChIP-seq解析は、網羅的な転写因子結合サイト解析の有効な手法の一つです。しかし、ChIP-seq解析の精度は抗体の品質に依存している問題点がありました。本論文では、ビオチン化タグを転写因子に付加して発現させ、アビジンビーズにより回収することで、ChIP-seq解析に適した抗体が得られない場合や多種類の転写因子を対象とする場合に、より簡便で安定したChIP-seq解析ができることを報告しています。[more…]
- 論文
Matsuda, K. et al., ChIP-seq analysis of genomic binding regions of five major transcription factors highlights a central role for ZIC2 in the mouse epiblast stem cell gene regulatory network. Development 144 (11): 1948-1958, 2017. [PMID 28455373]
- 寄託されたリソース
pCAGGS-BLRP-BirA (cat# RDB15774)
脂質ラフトの解析を可能にする蛍光標識発現プラスミドのご紹介 (2018/2/6 N.N.)
- 脂質ラフトは、細胞膜上の微小領域であり、シグナル伝達やエンドサイト―シスなどにおいて重要な役割を果たしていると考えられています。これまで、脂質ラフトを構成するスフィンゴミエリンやコレステロールを個々に標識する手段が乏しく、詳細な解析が困難でした。[more…]
- 理化学研究所 小林脂質生物学研究室の小林俊秀主任研究員（研究当時）らのグループは、脂質に結合するタンパク質に蛍光タンパク質を融合し、プローブとすることで脂質ラフトを可視化する手法を開発しました。
- 当開発室では、これらの脂質ラフト、スフィンゴミエリン、コレステロールを標識できるmCherryあるいはGFPのプラスミドを提供しています。活発なご利用をお待ちしております。
- 参考Webサイト、参考文献
脂質ラフト案内サイト [link]
マイタケ由来タンパク質がインフルエンザウイルスの増殖を抑制 (RIKEN, 2016.8) [link]
Makino, A. et al. FASEB J., 31 (4): 1301-1322, 2017. [PMID: 27492925]
Makino, A. et al. FASEB J., 29 (2): 477-493, 2015. [PMID: 25389132]
Shimada, Y. et al. Eur. J. Biochem., 269 (24): 6195-6203, 2002. [PMID: 12473115]
Gli認識配列レポーターを用いたHedgehogシグナルの解析 (2018/02/06 T.M.)
- 骨粗しょう症の誘発とHedgehogシグナルの抑制における酸化ストレスの影響を明らかにするために、マウス胚由来間葉系C3H10T1/2細胞の骨芽細胞分化 について、介在因子と想定されているMAPKに注目して解析しました。C3H10T1/2細胞の酸化ストレスとMAPKインヒビターの影響下でGliを介した転写活性化を観察するために、Gli転写因子認識配列を持つルシフェラーゼレポーターが使用され、JNK1によるGliを介した転写活性化の抑制が示唆されました。[more…]
- 論文
Shiohama, T., Fujii, K., Uchikawa, H., Takatani, T., Mizuochi, H., Kohno, Y. Oxidative stress-induced JNK1 phosphorylation inhibits hedgehog signalling and osteoblast differentiation. Cell Biol. Int. Rep. 21 (2): 53-62 (2014).
- 使用されたリソース
8×3’Gli-BS-delta51-LucII (cat# RDB08061)
8xm3’Gli-BS-delta51-LucII (cat# RDB08062)
pcDNA3.1-His-Gli1 (cat# RDB08064)
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