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クロンテック社との、 蛍光タンパク質DsRed2とmCherryの学術利用目的の保存と提供に関するLIMITED USE LICENSE締結

BRCからのお知らせ

オーキシンデグロン法 (AID system) によるタンパク質発現制御


  • オーキシン依存的に目的タンパク質を分解することで、発現制御します。
  • 培養細胞にシロイヌナズナ由来aidタグを付加した目的タンパク質とイネF-boxタンパク質TIR1をあらかじめ同時に発現させておき、培地にオーキシンを添加することで発現タンパク質の分解を誘導します。

クローン一覧

Generation of conditional auxin-inducible degron (AID) cells and tight control of degron-fused proteins using the degradation inhibitor auxinole.

Yesbolatova, A., Natsume, T., Hayashi, K.I., Kanemaki, M.T.
Methods pii: S1046-2023 (18) 30331-1, 2019. PMID: 31026591.

Rapid Protein Depletion in Human Cells by Auxin-Inducible Degron Tagging with Short Homology Donors.

Natsume, T., Kiyomitsu, T., Saga, Y., Kanemaki, M.T.
Cell Reports 15: 210-218, 2016. PMID: 27052166.

Table 1. mAID tags
a. N-terminal tagging.

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Attached tag at the N-terminus
mAID mAID-mClover mAID-mCherry2 mAID-Nluc
Hygro pMK344 pMK345 pMK346 pMK401
BSD pMK347 pMK348 pMK349 pMK407

 
b. C-terminal tagging.

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Attached tag at the C-terminus
mAID mAID-mClover mAID-mCherry2 mAID-Nluc
Neo pMK286 pMK289 pMK292 pMK394
Hygro pMK287 pMK290 pMK293 pMK408
BSD pMK391 pMK392 pMK393 pMK409
Bsr pMK288 pMK291 pMK294  

 
Table 2. Tags without mAID.
a. N-terminal tagging.

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Attached tag at the N-terminus
mClover mCherry2 S tag-3FLAG
Hygro pMK376 pMK377 pMK375

 
b. C-terminal tagging.

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Attached tag at the C-terminus
mClover mCherry2 S tag-3FLAG
Neo pMK277 pMK280 pMK283
Hygro pMK278 pMK281 pMK284
BSD pMK388 pMK389 pMK390
Bsr pMK279 pMK282 pMK285

 
Table 3. CsTIR1 expression vectors.

Catalog# Name of clone Running title
RDB13918 pMK232 OsTIR1 expression vector, PURO
RDB13919 pMK243 OsTIR1 expression vector, PURO
RDB16811 pMK364 OsTIR1 expression vector, loxP-PURO-loxP
RDB16812 pMK365 OsTIR1 expression vector, loxP-PURO-loxP

 
Table 4. Helper plasmid for knock-in a expression vector to the human AAVS1 site.

RDB13917 AAVS1 T2 CRIPR in pX330 A CRISPR/Cas plasmid for making DNA dounle-strand break at the human AAVS1 locus.

 


An auxin-based degron system for the rapid depletion of proteins in nonplant cells.

Nishimura, K., Fukagawa, T., Takisawa, H., Kakimoto, T., Kanemaki, M.
Nat. Methods., 6, 917-922, 2009. PMID: 19915560.

Catalog no. Name of clone Running title Type
RDB08468 pNHK60 Expression clone for an auxin-based degron (AID) system Plasmid
RDB08469 pMK106 Expression clone for an auxin-based degron (AID) system Plasmid
RDB08470 pMK107 Expression clone for an auxin-based degron (AID) system Plasmid
  • Supplementary Figure 11 for pMK106 (aid-CENPH)
  • Supplementary Figure 11 for pMK107 (CENPH-aid)
  • Supplementary figure 10 for pNHK60 (pIRES OsTIR1-EGFP-IAA17)

construction images

参考文献・関連文献

  1. Yesbolatova, A., Natsume, T., Hayashi, K.I., Kanemaki, M.T. Generation of conditional auxin-inducible degron (AID) cells and tight control of degron-fused proteins using the degradation inhibitor auxinole. Methods pii: S1046-2023 (18) 30331-1, 2019. PMID: 31026591.
  2. Research highlights
    オーキシンデグロン(AID)法のためのCRISPR/Cas9を利用した新規タグ導入と分解阻害剤の開発
  3. Natsume, T., Nishimura, K., Minocherhomji, S., Bhowmick, R., Hickson, I.D., Kanemaki, M.T. Acute inactivation of the replicative helicase in human cells triggers MCM8-9-dependent DNA synthesis. Genes Dev. 31 (8): 816-829, 2017.. PMID: 28487407.
  4. Natsume, T., Kiyomitsu, T., Saga, Y., Kanemaki, M.T. Rapid Protein Depletion in Human Cells by Auxin-Inducible Degron Tagging with Short Homology Donors. Cell Reports 15: 210-218, 2016. PMID: 27052166.
  5. プレスリリース
    壊れた「DNAのファスナー」を修理するには?~細胞がDNAをコピーする際のバックアップシステムを発見~
  6. Takagi, M., Natsume, T., Kanemaki, M.T., Imamoto, N. Perichromosomal protein Ki67 supports mitotic chromosome architecture. Genes Cells 21 (10): 1113-1124, 2016. PMID: 27610954.
  7. Samejima, K., Ogawa, H., Ageichik, A.V., Peterson, K.L., Kaufmann, S.H., Kanemaki, M.T., Earnshaw, W.C. Auxin-induced Rapid Degradation of Inhibitor of Caspase-activated DNase (ICAD) Induces Apoptotic DNA Fragmentation, Caspase Activation, and Cell Death: A CELL SUICIDE MODULE. J. Biol. Chem. 289 (45): 31617-31623, 2014. PMID: 25248749
  8. Rodriguez-Bravo, V., Maciejowski, J., Corona, J., Buch, H.K., Collin, P., Kanemaki, M.T., Shah, J.V., Jallepalli, P.V. Nuclear pores protect genome integrity by assembling a premitotic and Mad1-dependent anaphase inhibitor. Cell 156 (5): 1017-1031, 2014. PMID: 24581499
  9. Kanemaki, M.T. Frontiers of protein expression control with conditional degrons. Eur. J. Physiol., 465, 419-425, 2013. PMID: 23271452.
  10. Holland, A.J., Fachinetti, D., Han, J.S., Cleveland, D.W. Inducible, reversible system for the rapid and complete degradation of proteins in mammalian cells. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 109 (49): E3350-E3357, 2012. PMID: 23150568
  11. Nishimura, K., Fukagawa, T., Takisawa, H., Kakimoto, T., Kanemaki, M. An auxin-based degron system for the rapid depletion of proteins in nonplant cells. Nat. Methods., 6, 917-922, 2009. PMID: 19915560.
  12. Masato Kanemaki Lab Resources
  13. プレスリリース
    取り除けば働きがわかる!~特定のヒト細胞内タンパク質を素早く取り除いて機能を探る方法を開発~
    プレスリリース資料 [PDF]
  14. BioResource Now! Issue 7, July 2011 (PDF, in Japanese)
  15. BioResource Now! Issue 7, July 2011 (PDF, in English)

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        FAX: 029-836-9120

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    • 書式の詳細は「申込みに必要な書式」をご覧ください。

(GRP0016j 2014.11.11 T.M.)

2019.05.16