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クロンテック社との、 蛍光タンパク質DsRed2とmCherryの学術利用目的の保存と提供に関するLIMITED USE LICENSE締結

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オーキシンデグロン法 (AID system) によるタンパク質発現制御


  • オーキシン依存的に目的タンパク質を分解することで、発現制御します。
  • 培養細胞にシロイヌナズナ由来aidタグを付加した目的タンパク質とイネF-boxタンパク質TIR1をあらかじめ同時に発現させておき、培地にオーキシンを添加することで発現タンパク質の分解を誘導します。

クローン一覧

Natsume, T., Kiyomitsu, T., Saga, Y., Kanemaki, M.T.
Rapid Protein Depletion in Human Cells by Auxin-Inducible Degron Tagging with Short Homology Donors.
Cell Reports 15: 210-218, 2016. PMID: 27052166.

Table 1. Available mAID-tag with fluorescent and selection markers.

Selection
marker
Attached tag at the C-terminus
mAID mAID-mClover mAID-mCherry2
Neo pMK286 pMK289 pMK292
Hygro pMK287 pMK290 pMK293
Bsr pMK288 pMK291 pMK294

Please note that the plasmids containing the Neo marker do not contain the loxP sites, which are intended for removal of the marker.
 
Table 2. CsTIR1 expression vectors and helper plasmid to knock-in the expression vectors.

Catalog no. Name of clone Running title
RDB13918 pMK232 OsTIR1 expression vector
RDB13919 pMK243 OsTIR1 expression vector
RDB13917 AAVS1 T2 CRIPR in pX330 Helper for knock-in the expression vector to the human AAVS1 site

Cell line HCT116 CMV-OsTIR1 (RCB4662) harbouring pMK232 is now available form the Cell Bank.
 
Table 3. Tags without mAID are also available.

Selection
marker
Attached tag at the C-terminus
mClover mCherry2 S tag-3FLAG
Neo pMK277 pMK280 pMK283
Hygro pMK278 pMK281 pMK284
Bsr pMK279 pMK282 pMK285

Please note that the plasmids containing the Neo marker do not contain the loxP sites, which are intended for removal of the marker.
 
Please refer Fig. 4 of Natsume, T., Cell Reports 15, 210-218 (2016) for an instruction about how to use these clones.


Nishimura, K., Fukagawa, T., Takisawa, H., Kakimoto, T., Kanemaki, M. An auxin-based degron system for the rapid depletion of proteins in nonplant cells. Nat. Methods., 6, 917-922, 2009. PMID: 19915560.

Catalog no. Name of clone Running title Type
RDB08468 pNHK60 Expression clone for an auxin-based degron (AID) system Plasmid
RDB08469 pMK106 Expression clone for an auxin-based degron (AID) system Plasmid
RDB08470 pMK107 Expression clone for an auxin-based degron (AID) system Plasmid
  • Supplementary Figure 11 for pMK106 (aid-CENPH)
  • Supplementary Figure 11 for pMK107 (CENPH-aid)
  • Supplementary figure 10 for pNHK60 (pIRES OsTIR1-EGFP-IAA17)

RDB08468a

参考文献・関連文献

  1. Natsume, T., Nishimura, K., Minocherhomji, S., Bhowmick, R., Hickson, I.D., Kanemaki, M.T., Acute inactivation of the replicative helicase in human cells triggers MCM8-9-dependent DNA synthesis. Genes Dev. DOI:10.1101/gad.297663.117
  2. プレスリリース
    壊れた「DNAのファスナー」を修理するには?~細胞がDNAをコピーする際のバックアップシステムを発見~
  3. Takagi, M., Natsume, T., Kanemaki, M.T., Imamoto, N. Perichromosomal protein Ki67 supports mitotic chromosome architecture. Genes Cells 21 (10): 1113-1124, 2016. PMID: 27610954.
  4. Samejima, K., Ogawa, H., Ageichik, A.V., Peterson, K.L., Kaufmann, S.H., Kanemaki, M.T., Earnshaw, W.C. Auxin-induced Rapid Degradation of Inhibitor of Caspase-activated DNase (ICAD) Induces Apoptotic DNA Fragmentation, Caspase Activation, and Cell Death: A CELL SUICIDE MODULE. J. Biol. Chem. 289 (45): 31617-31623, 2014. PMID: 25248749
  5. Rodriguez-Bravo, V., Maciejowski, J., Corona, J., Buch, H.K., Collin, P., Kanemaki, M.T., Shah, J.V., Jallepalli, P.V. Nuclear pores protect genome integrity by assembling a premitotic and Mad1-dependent anaphase inhibitor. Cell 156 (5): 1017-1031, 2014. PMID: 24581499
  6. Kanemaki, M.T. Frontiers of protein expression control with conditional degrons. Eur. J. Physiol., 465, 419-425, 2013. PMID: 23271452.
  7. Holland, A.J., Fachinetti, D., Han, J.S., Cleveland, D.W. Inducible, reversible system for the rapid and complete degradation of proteins in mammalian cells. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 109 (49): E3350-E3357, 2012. PMID: 23150568
  8. Nishimura, K., Fukagawa, T., Takisawa, H., Kakimoto, T., Kanemaki, M. An auxin-based degron system for the rapid depletion of proteins in nonplant cells. Nat. Methods., 6, 917-922, 2009. PMID: 19915560.
  9. Masato Kanemaki Lab Resources
  10. プレスリリース
    取り除けば働きがわかる!~特定のヒト細胞内タンパク質を素早く取り除いて機能を探る方法を開発~
    プレスリリース資料 [PDF]
  11. BioResource Now! Issue 7, July 2011 (PDF, in Japanese)
  12. BioResource Now! Issue 7, July 2011 (PDF, in English)

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(2014.11.11 T.M.)

2017.05.10