高発光ルシフェラーゼ

高発光ルシフェラーゼ

Akaluc 新規開発の赤色発光のルシフェラーゼ

ホタルの生物発光システムは、生命現象のイメージングに汎用されていますが、発光基質の組織透過性が低いという欠点がありました。理研脳神経科学研究センターの宮脇 敦史先生、岩野 智先生、電気通信大学大学の牧 昌次郎先生らのグループは、生きた動物個体深部を非侵襲的に観察できる人工生物発光システムAkaBLIを開発しました。

AkaBLIシステムは、組織透過性の向上した人工基質AkaLumineとAkaLumineに合わせて開発した人工酵素Akalucで構成されています。AkaBLIの発光シグナルの強度は、従来と比べ100~1000倍です。

宮脇研究室より、人工酵素Akalucの発現ベクターが当遺伝子材料開発室に寄託され、提供可能となりました。皆様の活発なご利用をお待ちしております。

(2018.05.07 N.N.)


D-ルシフェリンのまま高い強度の発光が得られるルシフェラーゼ

一般的な北米産ホタル由来のルシフェラーゼと比較して、2 倍以上、最大で 4倍程の明るい発光強度が得られる日本産、ならびにマレーシア産 ( ※1 ) ホタル由来のルシフェラーゼ遺伝子です。オリンパス株式会社 小江克典先生らによって開発されました。基質である D- ルシフェリンとの反応によって高い発光強度を得られることが確認されています(参考文献 1、2、3、4、5)。

1. ホタル由来ルシフェラーゼ 特開2012-235756
2. ホタル由来ルシフェラーゼ 特開2013-74861
3. ホタル由来ルシフェラーゼ 特開2013-138668
4. ホタル由来ルシフェラーゼ 特開2013-81459
5. FIREFLY LUCIFERASE United States Patent Application US 2015/0291938 A1

ルシフェラーゼをクローニングした発現ベクターをHeLa細胞に導入し、2mM D-luciferin存在下で発光させた。左上からPmatLuc1、DkumLuc1、MALuci2Luc。右上からSflaRE1Luc、PsagRE1Luc。

選べる 3 色発光 !多色観察に応用できます

D- ルシフェリンを基質として緑色黄色赤色の発光が得られます。これらを組み合わせた多色発光観察にも応用できます。

Catalog no. Name of clone Origin Intracellular luminescence intensity(vie, Phothinus pyralis) Maximal absorption wavelength (pH8, in vitro) misc.
25℃ 37℃
RDB14359 pPmatLuc1 Pyrocoelia matsumurai 4 times or more 560 nm 567 nm luciferase cDNA is cloned in pUC19 vector.
RDB14360 pDkumLuc1 Drilaster kumejimensis 4 times 558 nm 562 nm
RDB14363 pMALuci2Luc Malaysian Luciola sp. ※1 2 times 556 nm 557 nm
RDB14362 pSflaRE1Luc Stenocladius flavipennis 2 times 608 nm 609 nm
RDB14361 pPsagRE1Luc Pristolycus sagulatus 2 times 605 nm 606 nm

環境要因に作用されにくい高い安定性があります

pH 変化や温度変化などに起因する発光色への影響が少なく、安定した解析結果を得られます。

大腸菌で発現させ精製したルシフェラーゼとGTA Buffer(最終濃度200mM)、ATP(最終濃度2mM)、MgSO4(最終濃度2mM)、D-Luciferin(最終濃度1mM)を含む反応液で発光させた。左、25℃。右、37℃。
PmatLuc1
DkumLuc1
MALuci2Luc
PsagRE1Luc
SflaRE1Luc

※1 生物多様性条約に基づきPerak State Development Corporation, Nimura Genetic Solutions およびオリンパス株式会社の共同開発。
(注) 画像、ならびにデータは、オリンパス株式会社から提供を受け、編集して掲載。
 


Artificial Luciferase Variants

Catalog # Name of clone Running title Publication
RDB19616 ALuc23 Expression vector of artificial luciferase variant ALuc23 derived from the copepod gene database for mammalian cell imaging. Kim, S.B. et al., 2013
RDB19617 ALuc49 Expression vector of artificial luciferase variant ALuc49 derived from the copepod gene database for mammalian cell imaging. Kim, S.B. et al., 2017

Reference

  • Kim, S.B. et al. (2013) Bioconjug. Chem. 24 (12): 2067-2075. PMID 24237362
  • Kim, S.B. et al. (2017) ACS Comb. Sci. 19 (9): 594-599. PMID 28742969

 


JNC Corporation’s Resource

Aequorea victoria Aequorin

Catalog # Name of clone Running title Publication
RDB19836 pAQ-B Expression vector of A. victoria Aequorin, wild type. Inouye, S. et al., 1985
RDB19830 pJN-opAQ Expression vector of A. victoria Aequorin, codon-optimized for human (opAQ). Inouye, S. et al., 1985
RDB19847 pJNC-opAQ Mammalian expression vector of A. victoria Aequorin, codon-optimized (opAQ). Inouye, S. et al., 2015
RDB19848 pJNC-COsp-opAQ Mammalian expression vector of human cytochrome C oxidase signal peptide sequence(COsp) and A. victoria Aequorin, codon-optimized (opAQ). Inouye, S. et al., 2015

Clytia gregaria ClytinI and ClytinII

Catalog # Name of clone Running title Publication
RDB19837 pCL41 Expression vector of C. gregaria ClytinI, wild type. Inouye, S. et al., 1993
RDB19838 pCL31 Expression vector of C. gregaria ClytinII, wild type. Inouye, S., 2008
RDB19831 pJN-opCLII Expression vector of C. gregaria ClytinII, codon-optimized for human (opCLII). Inouye, S. et al., 2015
RDB19849 pJNC-opCLII Mammalian expression vector of C. gregaria ClytinII, codon-optimized (opCLII). Inouye, S. et al., 2015
RDB19850 pJNC-COsp-opCLII Mammalian expression vector of human cytochrome C oxidase signal peptide sequence(COsp) and C. gregaria ClytinII, codon-optimized (opCLII). Inouye, S. et al., 2015

Renilla reniformis luciferase

Catalog # Name of clone Running title Publication
RDB19853 pJNC-opRL Mammalian expression vector of R. reniformis luciferase, codon-optimized (opRLuc). Inouye, S. et al., 2015
RDB19854 pJNC-opRL547 Mammalian expression vector of R. reniformis Red-shiffted luciferase, codon-optimized (opRLuc547), 547 nm peak. Unpublished bioresource
RDB19832 pJN-RLBP Expression vector of R. reniformis luciferin-binding protein (RLBP). Inouye, S. et al., 2007

Luciola cruciata luciferase

Catalog # Name of clone Running title Publication
RDB19833 pJN-opLcLuc Expression vector of L. cruciata firefly luciferase, codon-optimized for human (opLcLuc). Inouye, S. et al., 2015

Photinus pyralis luciferase

Catalog # Name of clone Running title Publication
RDB19834 pJN-opPyLuc Expression vector of P. pyralis firefly luciferase, codon-optimized for human (opPyLuc). Inouye, S. et al., 2015

Oplophorus gracilorostris luciferase

Catalog # Name of clone Running title Publication
RDB19840 pKAZ-412 Expression vector of O. gracilorostris 19 kDa Protein of Oplophorus Luciferase (KAZ), catalytic component. Inouye, S. et al., 2000
RDB19841 pJN-eKAZ Expression vector of O. gracilorostris enhanced 19 kDa Protein of Oplophorus Luciferase (eKAZ). Inouye, S. et al., 2014
RDB19851 pJNC-eKAZ Mammalian expression vector of O. gracilorostris enhanced 19 kDa Protein of Oplophorus Luciferase (eKAZ). Inouye, S. et al., 2014
RDB19852 pJNC-GLsp-eKAZ Mammalian expression vector of signal peptide sequence of G. princeps Gaussia luciferase (GLsp) and O. gracilorostris enhanced 19 kDa Protein of Oplophorus Luciferase (eKAZ). Inouye, S. et al., 2014
RDB19842 pOL23 Expression vector of O. gracilorostris 35 kDa protein of Oplophorus luciferase, unknown function. Inouye, S. et al., 2000

Gaussia princeps luciferase

Catalog # Name of clone Running title Publication
RDB19845 pJNC-hINS-GLuc Mammalian expression vector of human preproinsulin (hINS) and G. princeps Gaussia luciferase (GLuc). Suzuki, T. et al., 2011a
RDB19846 pJNC-hMMP2-GLuc Mammalian expression vector of human matrix metalloprotease-2 (hMMP2) and G. princeps Gaussia luciferase (GLuc). Suzuki, T. et al., 2011b
RDB19855 pJNC-pGLuc Mammalian expression vector of G. princeps Gaussia luciferase, codon-optimized (GLuc). Inouye, S. et al., 2016

Vibrio fischeri NAD(P)H-flavin oxidoreductase

Catalog # Name of clone Running title Publication
RDB19835 pJN-FRase Expression vector of V. fischeri NAD(P)H-flavin oxidoreductase (FRase). Inouye, S., 1994

Reference

  • Inouye, S. et al. (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 82 (10): 3154-3158. PMID 3858813
  • Inouye, S. et al. (1993) FEBS Lett. 315 (3): 343-346. PMID 8422928
  • Inouye, S. (1994) FEBS Lett. 347 (2-3): 163-168. PMID 8033996
  • Inouye, S. et al. (2000) FEBS Lett. 481 (1): 19-25. PMID 10984608
  • Inouye, S. et al. (2007) Protein Expr. Purif. 52: 66-73. PMID 16997571
  • Inouye, S. J. Biochem. 143 (5):711-717, 2008. PMID 18296715
  • Inouye, S. et al. (2014)Biochem. Biophys. Res. Commun. 445 (1): 157-162. PMID 24491536
  • Inouye, S. et al. (2015) Protein Expr. Purif. 109: 47-54. PMID 25665506
  • Inouye, S. et al. (2016) Protein Expr. Purif. 128: 93-100. PMID 27506135
  • Suzuki, T. et al. (2011a) Anal. Bichem. 415 (2): 182-189. PMID 21477579
  • Suzuki, T. et al. (2011b) Plos One. 6 (9): e25243. PMID 21969874

Bacterial luciferase

Vibrio harveyi luciferase

Catalog # Name of clone Running title Publication
RDB18951 pHLUX20 Expression vector of bacterial luciferase in Nitrosomonas europaea as a host strain. Iizumi, T., 1998; Iizumi, T., 1997

Reference

  • Iizumi, T. et al. (1998) Appl. Environ. Microbiol. 64 (10): 3656-3662. PMID 9758781
  • Iizumi, T. and Nakamura, K. (1997) Appl. Environ. Microbiol. 63 (5): 1777-1784. PMID 9143112

Arranged vector

Catalog no. Name of resource Type
RDB19350 pGL4.14-E1bTATA
Luciferase reporter vector of the minimal adenovirus E1b promoter sequence.
firefly
RDB03988 pCMVluc+
Expression vector of firefly luciferase
firefly
RDB06411 pGL3-RSV
Expression vector of firefly luciferase, RSV promoter
firefly
RDB03989 pCAluc+
Expression vector of firefly luciferase
firefly
RDB02443 pCAcc-Luc+
Expressing luciferase under the control of CAG promoter
firefly
RDB02444 pLRICALuc+
Shuttle vector to generate recombinant adenovirus
firefly
RDB02968 pTcf7wtluc
Reporter plasmid carring TCF-binding consensus sequence
firefly
RDB02969 pTcf7mtluc
Reporter plasmid carring TCF-binding consensus sequence
firefly
RDB07031 ptk-luc
Reporter construct with luciferase expression under tk promoter
firefly
RDB07032 pFGF4tk-luc
Reporter construct with luciferase expression under FGF4 and tk promoter
firefly
RDB02453 AxCA Luc+
Recombinant adenovirus expressing luciferase gene
firefly
RDB04026 pKM2L
Reporter construct with Renilla luciferase gene
Renilla
RDB05549 pKM2L-pvTK
HSV herpes simplex virus thymidine kinase (HSV-TK)
Renilla
RDB05550 pKM2L-pvSV40
SV40 simian virus 40 early enhancer/promoter region (SV40)
Renilla
RDB05551 pKM2L-pvCMV
CMV cytomegalovirus immediate enhancer/promoter (CMV)
Renilla
RDB06408 pRL-CMV mut1
Expression vector of Renilla luciferase, mutated CMV promoter
Renilla
RDB06409 pRL-CMV mut2
Expression vector of Renilla luciferase, mutated CMV promoter
Renilla
RDB06410 pRL-RSV
Expression vector of Renilla luciferase, RSV promoter
Renilla

 


(GRP0025j 2016.11.16 N.N.)

2023.09.28



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