遺伝子材料の情報

遺伝子材料の維持・保存・品質管理

(2) 組換えアデノウイルス [参照]
受け取った組換えアデノウイルスは、増殖のための宿主細胞であるHEK293細胞に直ちに感染させ、増殖性があることを確認します。組換えアデノウイルスを提供に十分な量までウイルスを増殖させた後、感染細胞の破砕溶液として保存します。通常、増殖のために宿主細胞への感染を4回程度繰り返します。最初の1から2回目の感染後にウイルスDNAを調製し、本来含まれないはずの自律増殖可能アデノウイルス(RCA)の存在否定試験をPCRにより行います。ウイルスが十分に増えた段階でウイルスDNAを調製し、制限酵素切断パターンの電気泳動にて検定します。検定を合格したウイルス液を1回提供量づつ分注し、-80℃で保存します。
提供時は、保存時に提供分量づつ保存したバイアルをそのまま利用者に送付しています。

(3) 宿主
受け取った宿主は、指定された培地で培養し、薬剤耐性、栄養要求性試験ならびに増殖性検定を行います。指定された培地で薬剤耐性、栄養要求性試験ならびに増殖性検定を行った宿主は、グリセロールストックとして-80℃で保存します。
提供時は、提供依頼に応じて、保存したバイアルから指定された培地で薬剤耐性ならびに増殖性検定を行いつつ、培養し、利用者に送付しています。

(4) ライブラリー
受け取ったライブラリーは、増殖のための宿主（主に大腸菌）に直ちに導入し、増殖性、薬剤耐性があることを確認します。増殖による含まれるクローンの偏りが生じないよう、開発者と連絡を取り、適切な培養量の宿主を用います。開発者により指定された方法で培養したライブラリーは、提供容量づつプラスチックバイアルに分注し、-80℃で保存します。
提供時は、保存時に提供分量づつ保存したバイアルをそのまま利用者に送付しています。

(5) DNAクローンセット
受け取ったクローンセットは、輸送中の容器の破損、凍結状態を記録した後、直ちに-80℃超低温フリーザーに保管します。指定された培地で薬剤耐性ならびに増殖性検定を行いつつ、保存用ならびに提供用レプリカを作製します。オリジナルと作製したレプリカはグリセロールストックとして-80℃で保存します。
提供時は、作製したレプリカをそのまま利用者に送付しています。
クローンセットから提供する単独クローンの場合、提供依頼に応じて、BACクローンは薬剤耐性ならびに増殖性検定を行いつつ培養し、利用者に送付しています。cDNAクローンは薬剤耐性ならびに増殖性検定を行いつつ培養し、DNAの制限酵素切断パターンの電気泳動、挿入遺伝子末端塩基配列の検定の後に、DNA溶液を利用者に送付しています。

(6) ゲノムDNA
微生物ゲノムDNA抽出用の微生物株は、微生物材料開発室（ＪＣＭ）で培養し、集菌したのちに遺伝子材料開発室に送付されます。培養ロット毎にゲノムDNAを抽出し、以下の検査を行っています。抽出したDNAは吸光度による濃度を測定し、電気泳動像により、分譲量が１μg以上であることを確認しています。同時に20kbp以上の長さとなることを確認しています。抽出したゲノムDNAを段階希釈した鋳型により16S rDNA領域のPCR増幅を確認しています。16S rDNA領域の塩基配列を決定し、公共データベース上の塩基配列と一致していることを確認しています。抽出したゲノムDNAは提供容量づつプラスチックバイアルに分注し、-30℃で保存します。
提供時は、保存時に提供分量づつ保存したバイアルをそのまま利用者に送付しています。