キーワード検索

 Keywords  
※ しぼり込み検索をする場合は、スペース(半角空白文字)で区切って単語を入力して下さい。

リソース情報

クロンテック社との、 蛍光タンパク質DsRed2とmCherryの学術利用目的の保存と提供に関するLIMITED USE LICENSE締結

遺伝子発現用・タンパク質産生用クローン&ベクター
  Promoter collection
  Epitope tag fusion clones
  SEREX cDNA クローン
  HLA antigen cDNA clone
  Nakamura & White RFLP clone

遺伝子解析のためのリソース
  培養微生物
  哺乳動物培養細胞
  実験動物個体
  試験管内実験

クローンセット&関連リソース
  Genomic clone
  cDNA clone
  Expression clone
  Libraries
  Others

生物種別リソース
  ヒト、マウス、ラット等哺乳動物
  ツメガエル、ホヤ等その他動物
  酵母・糸状菌
  微生物
  植物

組換えウイルス
  組換えアデノウイルス
  組換えウイルス産生用シャトルベクター

ゲノムDNA
  微生物株由来ゲノムDNA
  マウス系統由来ゲノムDNA

クローン検索
  キーワード検索
  寄託者リスト
  Gene Set Collection

微生物ゲノムDNAの調製


Preparation of Genomic DNA

  1. Suspend bacteria cells in 8 ml of [0.7 M NaCl, 0.1 M EDTA (pH 8.0)] in 50 ml conical tube.
  2. Add 1 ml of 10 mg/ml lysozyme in PBS.
  3. Add 30 ul of 100 mg/ml labiase.
  4. Incubate mixture in 37oC water bath for 1 hour.
  5. Add 1 ml of [0.5 M tris-Cl (pH 7.5), 5% SDS].
  6. Add 25 ul of 10 mg/ml protease K.
  7. Incubate mixture at 60oC for 1 hour.
  8. Extraction of DNA with phenol.
  9. Extraction of DNA with phenol-chloroform.
  10. Extraction of DNA with chloroform-isoamyl alcohol (24:1).
  11. Precipitation of DNA with cold ethanol.
  12. Wash precipitated DNA with 70% ethanol.
  13. Dissolve DNA in 600 ul TE buffer with 1ul of 10 mg/ml RNaseA.
  14. Incubate DNA at 37oC for 30 min.
  15. Add 5 ul of 10 mg/ml protease K.
  16. Incubate DNA at 60oC for 1 hour.
  17. Extraction of DNA with phenol.
  18. Extraction of DNA with phenol-chloroform.
  19. Extraction of DNA with chloroform-isoamyl alcohol (24:1).
  20. Add 100 ul of 3 M sodium acetate (pH5.5).
  21. Add 1.2 ml cold ethanol.
  22. Wash precipitated DNA with 70% ethanol.
  23. Redissolve DNA in 200 ul TE buffer.
  24. Dilute 2 ul of DNA into 400 ul dH2O and analyze OD260.

Related Information

Primers for PCR of rRNA gene

Bacteria 16S rRNA
Name of primer Sequence
EB-20F 5′ AGTTTGATCCTGGCTC 3′
EB-350F 5′ TACGGGAGGCAGCAG 3′
EB-1100R 5′ AGGGTTGCGCTCGTTG 3′
EB-1400R 5′ ACGGGCGGTGTGTAC 3′
EB-1530R 5′ AAGGAGGTGATCCAGCC 3′
Archaea 16S rRNA
Name of primer Sequence
A-20F 5′ TCCGGTTGATCCTGCCG 3′
A-340F 5′ CCCAGGCCCTACGGG 3′
A-520R 5′ GTATTACCGCGGCGGCTG 3′
A-1100R 5′ CGGGTCTCGCTCGTT 3′
A-1400R 5′ GACGGGCGGTGTGTGC 3′
Fungi 26S rRNA
Name of primer Sequence
ITS5 5′ GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG 3′
ITS4 5′ TCCTCCGCTTATTGATATGC 3′
NL1 5′ GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAG 3′
NL4 5′ GGTCCGTGTTTCAAGACGG 3′

Related Website

Related Articles